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智立中特(武漢)生物科技有限公司

質(zhì)粒設(shè)計(jì)、質(zhì)粒構(gòu)建服務(wù),并提供進(jìn)口微生物菌種、細(xì)胞資源,與國內(nèi)外多家研制單位,生物醫(yī)藥,第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),科研院所有著…

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質(zhì)粒載體網(wǎng)MM.1S 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

產(chǎn)品價(jià)格面議

產(chǎn)品品牌智立中特生物

最小起訂≥1 瓶

供貨總量1000 瓶

發(fā)貨期限自買家付款之日起 15 天內(nèi)發(fā)貨

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更新日期2022-09-09 16:58

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智立中特(武漢)生物科技有限公司

聯(lián) 系  人:肖素素(女士) 經(jīng)理 

聯(lián)系手機(jī):18907133396

聯(lián)系固話:400-009-7996

聯(lián)系地址:湖北省武漢市東湖高新開發(fā)區(qū)軟件新城健康智谷D2棟5樓

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商品信息

基本參數(shù)

品牌:

智立中特生物

所在地:

湖北 武漢市

起訂:

≥1 瓶

供貨總量:

1000 瓶

有效期至:

長(zhǎng)期有效

產(chǎn)品規(guī)格:

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
詳細(xì)說明
  細(xì)胞描述

該細(xì)胞系的母細(xì)胞株MM.1是從一位對(duì)類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對(duì)地塞米松耐藥。近緣細(xì)胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的,但對(duì)地塞米松敏感。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要兩周左右才能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。

細(xì)胞特性

1)來源:人、女性、外周血

2)形態(tài):成淋巴瘤細(xì)胞,懸浮和輕微的貼壁

3)含量:>1x10^6

4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

6)用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞在1000RPM條件下離心5min,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

4)半貼細(xì)胞(或貼壁不牢細(xì)胞):T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在70%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮的細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原來的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長(zhǎng)到70%-90%可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,在傳代過程中,需要收集T25瓶中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

5)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第,一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%,P/S青霉素-鏈霉素1%

2)注意事項(xiàng):

a.該細(xì)胞同時(shí)存在懸浮生長(zhǎng)和輕微的貼壁狀態(tài)。

b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時(shí)間,才能恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)。

c.細(xì)胞密度不可過高,在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代,否則容易成團(tuán)。

3)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

參考傳代比例:1:3-1:6,參考換液頻率:2-3天

4)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度和拍照。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

1)懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同,具體可以參考細(xì)胞說明書)可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。懸浮細(xì)胞的收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2).貼壁細(xì)胞的的消化,pbs清洗1-2次由于細(xì)胞貼壁不牢,pbs清洗過程中會(huì)有細(xì)胞脫落,所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細(xì)胞按正常的貼壁細(xì)胞處理。加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化。

3)將收集到的懸浮細(xì)胞,消化下貼壁細(xì)胞和pbs清洗液中的細(xì)胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例;

1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入3-4ml含10%血清的完全培養(yǎng)基來終止消化,收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml。

2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

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