HaCaT人永生化表皮細(xì)胞，細(xì)胞凍存：
    1、取待凍存的細(xì)胞用胰酶消化，用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。800r/min離心5min，棄上清收集細(xì)胞。如果是懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，可直接離心收集細(xì)胞。
    2、加入適量?jī)龃嬉海?0%甘油+90%培養(yǎng)基，或是10%DMSO+90%培養(yǎng)基）制成細(xì)胞懸液。細(xì)胞濃度宜大，3*106個(gè)/ml左右，并可適量增加小牛血清濃度至20%。
    3、細(xì)胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標(biāo)記（注明細(xì)胞種類、時(shí)間、條件等）。
    4、凍存管在4℃下存放30min，轉(zhuǎn)放-20℃1.5h~2h，再轉(zhuǎn)入-70℃4~12h后即可轉(zhuǎn)入液氮內(nèi)（-196℃），注意進(jìn)行登記。

     復(fù)蘇：
    1、取一搪瓷杯盛上適量自來水加熱至40℃左右。
    2、從液氮中取出凍存管立即投入40℃水中迅速解凍。
    3、取出凍存管，用75%酒精清潔管口，打開。
    4、離心去上清收集細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)基洗1次，加入3ml新鮮培養(yǎng)基，于小培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
    5、每日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，如果死細(xì)胞較多，復(fù)蘇次日應(yīng)換液。待細(xì)胞長(zhǎng)滿后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。