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熒光谷胱甘肽分析試劑盒問答
發布時間:2023-04-13        瀏覽次數:18        返回列表

1.Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定法如何工作?該測定實際量化了什么?

答:Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定試劑盒*綠色熒光*(貨號10056)包含僅與還原型谷胱甘肽(即GSH)反應而不與GSSG反應的探針。通過測量還原前的GSH濃度和還原后的總GSH濃度,用戶可以計算GSSG濃度以及GSH / GSSG比率。有關特定的方程式和過程,請查閱我們的示例協議。

2.我的Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析試劑盒的GSH和總GSH校準曲線是否有問題?為什么我的標準曲線沒有意義?

答:從理論上講,谷胱甘肽和總谷胱甘肽的校準曲線應相當接近。要記住的重要一點是,連續稀釋后[GSH]為5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563、0.0781和0 μM,而[TGSH]為10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125, 0.1563和0 μM。在相同的系列稀釋后。這是因為GSSG / GSH摩爾比為:1 GSSG? 2 GSH。因此,繪制標準曲線時,TGSH的x軸值需要是GSH的x軸值的兩倍。

3.我可以將Triton X-100用作Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比分析試劑盒*綠色熒光*(貨號10056)的裂解緩沖液嗎?我可以使用X緩沖液裂解/制備樣品嗎?

答:您可以使用Triton X-100,但是它可能會導致測定讀數的背景增加。有關特定緩沖液的其他問題,請通過helen@aatbio.com與我們的技術支持聯系。

4.在使用Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析試劑盒*綠色熒光*(貨號10056)之前,我需要對樣品進行脫蛋白處理嗎?

答;如果發現不一致或意外的結果,則一種解決方案可能是在使用測定之前對樣品進行脫蛋白處理。

5.為什么我的GSH濃度大于總GSH濃度?為什么我計算出的GSH / TGSH比值大于1?

答:這種結果有多種可能的原因。例如,[GSH]和[TGSH]之間可能沒有統計學上的顯著差異,表明樣品中的GSSG很少甚至沒有。在這種情況下,由于實驗偏差,GSH濃度可能會大大高于GSH總濃度。另一種可能的解釋是由于測定活性降低,可能導致測定結果不一致。該測定成分在室溫下以及暴露于光線下均不穩定,應在制備后的兩個小時內使用。對于具有更高穩定性的試劑盒,我們建議使用Amplite 快速熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率檢測試劑盒*綠色熒光*。

6.為什么總GSH標準溶液濃度等于GSSG標準溶液濃度的兩倍?為什么[GSSG]等于([總GSH]-[GSH])除以2?

答:還原后,1摩爾GSSG變為2摩爾GSH。因此,如果初始GSSG濃度為1μM,則還原后的GSH濃度為2μM。相反,要從[總GSH]中確定[GSSG],則必須除以2以說明GSSG與GSH的摩爾比:1 GSSG? 2 GSH。

7.Amplite 熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速檢測試劑盒 綠色熒光(Cat#10060)中提供的探針僅與還原的GSH反應,而與GSSG不反應。為什么還需要準備GSSG標準曲線?

答:在氧化應激期間,GSSG會在細胞中積累,從而增加GSSG與GSH的比例。由于Thiolite Green 520WS僅與GSH反應,因此必須首先將累積的GSSG酶轉化為GSH。因此,要測量GSH和總GSH,必須創建GSH和GSSG標準曲線。減少的GSH使用GSH標準測量,總GSH(GSH和GSSG)使用GSSG標準測量。要計算GSSG,請從總GSH中減去GSH量,然后使用此值確定終的GSH / GSSG比。

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