E.coli具有遺傳背景清晰、細胞增殖快、成本低、表達量高、穩(wěn)定性好和抗污染能力強等特點，適用于多種蛋白的表達。大腸桿菌蛋白表達系統(tǒng)是目前應(yīng)用較為廣泛，也是比較經(jīng)濟實惠的蛋白表達系統(tǒng)。缺點是該表達系統(tǒng)易形成包涵體，含有內(nèi)毒素，沒有翻譯后修飾的加工功能。該系統(tǒng)適用于表達原核來源的蛋白或不需要翻譯后修飾的真核來源蛋白，特別是小分子蛋白。
藍景科信擁有豐富的E.coli蛋白表達純化經(jīng)驗，熟練運用多種表達宿主菌，提供多種表達載體和標簽的選擇，為您提供優(yōu)質(zhì)的原核蛋白表達服務(wù)。
原核蛋白表達是指在原核細胞中表達蛋白質(zhì)，通常使用大腸桿菌或酵母細胞作為宿主細胞。原核蛋白表達具有快速、簡便、大規(guī)模產(chǎn)生目的蛋白質(zhì)的優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)研究、藥物開發(fā)、工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域。
原理：
原核蛋白表達的基本原理是將外源基因克隆到表達載體中，通過將重組載體導入宿主細胞中使之表達目的蛋白。基于表達載體的選擇不同，有多種表達策略可供選擇，例如強化啟動子、可誘導的表達系統(tǒng)、標簽蛋白標記等。此外，可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、細胞密度及時間等方法來提高蛋白產(chǎn)量。
原核蛋白表達的操作方法：
1.選擇適合的表達載體：合適的表達載體包括表達啟動子、編碼區(qū)、終止信號和選擇標記等。常用的載體有pET、pGEX、pMAL、pETDuet等。選擇適合的載體要考慮到表達效率、純度和易于操作等因素。
2.將目的基因克隆到載體中：將目的基因與載體酶切、連接，形成重組載體。連接需要注意將基因位于正確位置，使用合適的連接方式。
3.轉(zhuǎn)化宿主細胞：將重組載體導入宿主菌株E.coli中，可采用熱激法、化學法、電滲法等方式。需要注意重組過程的無菌操作和選擇正確的培養(yǎng)條件。
4.優(yōu)化培養(yǎng)條件：通過調(diào)整適宜的溫度、菌種、基本培養(yǎng)液的選擇等因素，提高目的蛋白的表達率。
5.蛋白質(zhì)提取：通過離心、超聲波裂解、化學方法等方式用不同的載體將表達蛋白提取出來。
6.純化：對提取出來的蛋白質(zhì)進行純化，常用的有離子交換、凝膠過濾、親和層析、逆流層析等方法。選擇純化方式需要考慮成本、產(chǎn)量和純度等因素。
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